小鼠角膜上皮细胞
1. 产品名称:小鼠角膜上皮细胞
2.组织来源:眼角膜组织
3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
4.细胞简介:
小鼠角膜上皮细胞分离自眼角膜组织;角膜位于眼球前壁的一层透明膜,约占纤维膜的前1/6,从后面看角膜呈正圆形,从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢,如有外物接触角膜,眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明,角膜并没有血管,透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层,由前向后依次为:上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下:①角膜是唯一的无血管的组织,具有透明的特性和合成许多蛋白的功能,分三层细胞层,外层即是上皮细胞;②角膜上皮细胞能参与先天性免疫,能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统;③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段,常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
5.方法简介:
联迈生物实验室分离的小鼠角膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
6.质量检测:
联迈生物实验室分离的小鼠角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
7.培养信息:
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 上皮细胞样
传代特性 可传1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
小鼠角膜上皮细胞体外培养周期有限;建议使用联迈生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
小鼠角膜上皮细胞是一种贴壁细胞,细胞形态程上皮细胞样,在技术部标准操作流程下,细胞可传1-2代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞传代
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按1:2比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。
3. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,原代细胞在消化后转移至其他实验器皿 (如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2),多聚懒氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%), 依据细胞种类而定 。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和联迈生物技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考