产品及特点:
本产品是用于MDA(Multiplex Displacement Amplification)技术的全基因组DNA扩增试剂盒,它利用随机引物结合在全基因组(变性后)的不同位置,然后利用具有超长DNA合成能力的phi29 DNA聚合酶,进行链取代合成。MDA扩增DNA的示意图如下:
本产品有如下特点:
1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力,故所得扩增DNA突变率比PCR低至少10倍。
2. 可以将基因组DNA扩增上万倍,非常适用于痕量珍贵样品。
3. 可使用各种来源的样品,尤其是痕量法医样品,包括全血,干血,发根,口腔粘膜刮液培养细胞,真菌和病毒等。
4. 操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须贵重PCR仪即可实现扩增。
5. 含有荧光染料,故可以实时检测扩增效果,不需要反应结束后电泳检测,避免浪费宝贵的扩增产物。
6. 产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析(片段差异,微卫星差异,SNP,STR)等。
7. 本产品足够25次10uL体系的全基因组扩增。
8. 本产品只能用于科研,且只适用于扩增纯化好的基因组DNA。
运输及保存:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
自备试剂:超纯水(无DNA和DNase污染)
使用方法:
1. 如果有N个DNA模板,则标记2N个PCR管,多出的一组为不加模板的阴性对照管。
2. 在PCR仪器上95℃3分钟变性模板DNA。注意:必须打开热盖。
3. 冰上放置待用。
4. 各加入1uL phi 29 DNA聚合酶(10U/uL),轻柔吹打混合均匀。
5. 放回PCR仪器,设置MDA反应为30℃ 24小时,65℃ 10分钟。由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以强烈推荐30℃扩增反应结束后,必须65℃保温20分钟以将酶彻底灭活,否则在保存过程中它会逐渐降解扩增得到的DNA。本产品含有荧光染料,故最好使用荧光定量PCR仪,设置在30℃时,每10分钟在SYBR通道采集一次荧光信号。10小时后,阳性样品应该有标准的S扩增曲线,无模板对照应该没有扩增曲线。示例如下:
6. 如果使用的常规PCR扩增,需要电泳检测(由于样本宝贵,不推荐此法)。
7. -20℃长期放置或立即使用。