植物磷脂酰肌醇 3 磷酸(PI3P)酶联免 疫分析(ELISA)试剂盒
货号:LM-PI3P-OT
使用目的
本试剂盒用于测定样本中磷脂酰肌醇 3 磷酸 (PI3P)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中磷脂 酰肌醇 3 磷酸(PI3P)水平。用纯化的磷脂酰肌醇 3 磷酸(PI3P)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包 被单抗的微孔中加入磷脂酰肌醇 3 磷酸(PI3P),和 HRP 标记的磷脂酰肌醇 3 磷酸(PI3P)抗原,使它们 竞争结合,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的磷脂酰肌醇 3 磷酸(PI3P) 的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸 光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中磷脂酰肌 醇 3 磷酸(PI3P)的含量。
标本要求
1.标本处理:
(1)水样采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查。
(2)组织样品用丁醇:甲醇: 水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查。
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加 样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次, 拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟。
7. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色 立转黄色)。
8. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各 孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的 浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将 样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以 稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分 钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中 加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性, 以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分 钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如 标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准 品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释 一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须 以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处 理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
检测范围
25ng/L -900 ng/L 4
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考!